1. 原理

　　根據紅細胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。A型紅細胞膜上含有A抗原，B型紅細胞膜上含有B抗原，AB型紅細胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B試劑是分別針對A抗原和B抗原的特異性抗體。可利用紅細胞凝集試驗，通過正、反定型準確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知的抗A、抗B試劑與受檢者的紅細胞混合時，與抗A試劑發生凝集者即為A型，與抗B分型試劑發生凝集者即為B型，與抗A、抗B試劑均發生凝集者即為AB型，與抗A、抗B試劑均不凝集者即為O型。所謂反定型，是用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗－A或/和抗－B.

　　2. 標本采集

　　2.1 標本種類：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。

　　2.2 標本要求：

　　2.2.1 抗凝劑：如用抗凝血，多主張用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。

　　2.2.2 用手指末梢血作血型檢測時，最少樣品量為100ul，如手指有

　　凍瘡，則主張采耳垂血。

　　3. 標本儲存：2小時內完成實驗，室溫放置下不超過8小時，4℃-8℃

　　保存不超過48小時。

　　4. 標本運輸：室溫運輸

　　5. 標本拒收標準：細菌污染、溶血標本不能作測定

　　6. 試劑

　　6.1 試劑名稱：ABO血型檢測試劑

　　6.2 試劑生產廠家：南京華欣藥業生物工程有限公司

　　6.3 試劑組成

　　試劑1：抗A分型試劑（藍色），效價1：128，2℃-8℃避光保存，室溫放置不宜過久。

　　試劑2：抗B分型試劑（黃色），效價1：128，2℃-8℃避光保存，室溫放置不宜過久。

　　試劑3：5％A、B及O型紅細胞鹽水懸液，自制。配制方法：分別采取已知A、 B、O三種血型的紅細胞，經鹽水洗滌3次，以壓積紅細胞配成不同濃度的紅細胞懸液。　

紅細胞懸液的配制

 

懸液濃度（％）	壓積紅細胞（滴）	鹽水（滴）
2 5 10 20	1 1 1 1	2ml（40） 0.8ml（16） 0.4ml（8） 0.2ml（4）

 

　　為了防止紅細胞懸液敏感性不一致，可隨機采取3個或以上的健康成人血液，按A、B、O型分別混合后，按上法制備。

　　7. 操作步驟

　　7.1 玻片法

　　7.1.1 取清潔玻片1張（或白瓷板1塊），用肥皂水刷洗后晾干，用蠟

　　筆劃出小格，并注明A、B字樣。將抗A試劑、抗B試劑各一滴分別滴于玻片（或瓷盤）上A、B處。分別取等體積待檢血樣（5％-10％紅細胞懸液或全血）于抗A試劑和抗B試劑。

　　7.1.2 另取潔凈玻片1張（或白瓷板1塊），用蠟筆劃成方格，標明A

　　細胞、B細胞和O細胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細胞懸液1滴。

　　7.1.3 用不同的竹簽將分型試劑與待檢血樣調勻，同時不停的搖動玻

　　片（或瓷盤）并觀察血型凝集（或溶血）反應。如以玻片做試驗時，也可用低倍鏡觀察結果。

　　7.2 試管法

　　7.2.1 取潔凈小試管（內徑10mm×60mm）2支，分別標上A、B字樣，

　　用滴管分別向A管滴加抗A分型試劑1滴。向B管滴加抗B分型試劑1滴。向A、B管各滴加待檢血樣的5％紅細胞懸液各1滴，混合。

　　7.2.2 另取潔凈小試管（內徑10mm×60mm）3支，分別標明A、B和

　　O細胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和O型5％紅細胞懸液1滴，混合。

　　7.2.3 搖勻后以1000轉/分的速度離心1分鐘判定結果。將試管輕輕

　　搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現象。如肉眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。

　　8. 結果判斷

　　8.1 觀察結果時既要看有無凝集，更要注意凝集強度，此有助于A、

　　B亞型、類B或cisAB的發現。

　　8.2 凝集強度判斷標準：

　　4＋＝紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。

　　3＋＝紅細胞凝集成數小塊，血清尚清晰。

　　2＋＝紅細胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細胞。

　　1＋＝肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞。

　　±=鏡下可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞。

　　MF＝混合凝集外觀是指鏡下可見少數紅細胞凝集，而絕大多數紅細胞仍呈分散分布。

　　－表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。

　　8.3 按下表報告受檢者紅細胞ABO血型

　　

 

ABO血型正反定型結果

 

分型血清＋受檢者紅細胞			受檢者	受檢者血清＋試劑紅細胞
抗－A ＋ — — ＋	抗－B — ＋ — ＋	抗－A＋B ＋ ＋ — ＋	血型 A B O AB	A細胞 — ＋ ＋ —	B細胞 ＋ — ＋ —	O細胞 — — — —

 

　　9. 臨床意義：輸血、器官移植與親子鑒定

　　10. 操作性能：快速簡便、特異性強、靈敏度高、重復性好。

　　11 超出范圍結果處理

　　11.1 紅細胞自凝：冷凝集系增高是最為常見原因。應用37℃-40℃的

　　生理鹽水洗滌紅細胞可去除紅細胞表面附著的導致紅細胞凝集的冷集素。

　　11.2 正反定型結果不一致原因

　　11.2.1 分型血清效價太低、親和力不強。如抗—A血清效價不高，可

　　將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。

　　11.2.2 紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例則不適當，使反應不明

　　顯，誤判為陰性反應。

　　11.2.3 受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性減弱（見于

　　白血病或惡性腫瘤）以及B類或cisAB等。

　　11.2.4 受檢者血清中蛋白紊亂（高球蛋白血癥），或實驗時溫度過高，

　　常引起紅細胞呈緡錢狀排列。

　　11.2.5 受檢者血清中缺乏應有的抗—A和抗—B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。

　　11.2.6 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可

　　溶性血型物質中和了相應的抗體。

　　11.2.7 由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型

　　不符的原因。

　　11.2.8 血清中有意外抗體，如自身抗—I，常引起干擾。

　　11.2.9 老年人血清中抗體水平大幅度下降。

　　11.3 正反定型結果不一致的解決方法：

　　11.3.1 另從受檢者采取1份新鮮血液標本，這樣可以糾正因污染或搞

　　錯樣本造成的不符合。

　　11.3.2 將紅細胞洗滌數次，配成2％鹽水細胞懸液，用抗—A、抗—B、

　　抗—AI，抗—A＋B及抗—H做試驗可以得到其它有用的信息。

　　11.3.3 對受檢紅細胞作直接抗球蛋白試驗，如結果呈陽性，表示紅細

　　胞已被抗體致敏。

　　11.3.4 用A1、A2、B、O紅細胞從自身紅細胞檢查受檢血清。如果

　　懷疑是抗—I，用O型（或ABO相合的）臍血紅細胞檢查。

　　11.3.5 如果試驗結果未見凝集，應將細胞及血清試驗至少在室溫和

　　4℃放置30min，用顯微鏡檢查核實。

　　11.3.6 如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細胞與抗A或抗

　　—B血清作吸收及放散試驗以及受檢者唾液作A、B、H血型物質測定。后者只對80％HAB分泌型的人有用。

　　11.3.7 如試驗結果紅細胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴，混合。往

　　往可使緡錢現象消失。應注意不應先加鹽水1滴于受檢者血清中而后和紅細胞作試驗，以免使血清中抗體被稀釋。

　　11.3.8 如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時，可用下列方法進行鑒別：

　　11.3.8.1 觀察細胞與抗—A及抗B的凝集強度，與抗A的反應要比抗

　　—B的反應強。這種區別用玻片法作試驗更為明顯。

　　11.3.8.2 用受檢者紅細胞與自身血清作試驗，血清中的抗—B不凝集

　　自身紅細胞上的類B抗原。

　　11.3.8.3 檢查唾液中是否有A、B物質，如果是分泌型，可檢出A物

　　質而無B物質。

　　11.3.8.4 核對患者的診斷，類B抗原的形成與結腸癌、直腸癌、革蘭

　　陰件桿菌感染有關。

　　12. 方法局限性

　　12.1 分型血清質量性能符合要求，用畢后，應放置冰箱保存，以免細菌污染。

　　12.2 試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。

　　12.3 操作方法應按規定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液，

　　以便容易核實是否漏加血清。

　　12.4 按理IgM抗—A和抗—B與相應紅細胞的反應溫度以4℃為最

　　強，但為了防止冷凝集現象干擾，一般仍在室溫（20℃-24℃）內進行試驗，37℃可使反應減弱。

　　12.5 離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性

　　或假陰性結果。

　　12.6 觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發性凝固以及緡錢狀排列的區別。

　　12.7 判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。

　　12.8 試劑一旦發現渾濁不得使用。

　　12.9 制紅細胞懸液時防止自凝現象。